Transformació bacteriana: diferència entre les revisions
Contingut suprimit Contingut afegit
m Traduint plantilla cite journal a ref-publicació |
m →Transformació per plasmidis: correccio d'una mala trauccio des de l'anglès |
||
Línia 28:
=====Transformació per plasmidis=====
Per tal de persistir i ser mantingut de forma estable a la cèl·lula, una molècula de DNA plasmídic ha de contenir un [[origen de replicació]], que el permet ser duplicat a la cèl·lula de forma independent del cromosoma (el nombre de còpies és variable podent variar usualment entre la desena i el centenar de 100 còpies de cada plasmidi per cèl·lula). Perquè la transformació normalment produeix una mescla de cèl·lules transformants rares i cèl·lules no-transformants abundants, es necessita un mètode que permeti identificar i seleccionar les cèl·lules que han adquirit els gens en un procés de modificació genètica (marcadors genètics o bioquímics). Els plasmidis utilitzats en experiments de transformació generalment contindran un gen que aporti resistència a un [[antibiòtic]] al qual els bacteris transfectats són sensibles. Les cèl·lules capaces
Un altre marcador, utilitzava per identificar cèl·lules d'[[E. coli]] que han adquirit plasmidis recombinants, és el gen de [[lacZ]], que codifica per a la β-[[galactosidasa]]. Perquè -galactosidasa és un tetràmer homo, amb cada monòmer constituït per un lacZ-α i una proteïna de lacZ-ω, si només s'expressa una de les dues proteïnes necessàries a la cèl·lula, no es formarà cap enzim funcional. Així, si una pressió d'''E. coli'' sense lacZ-α en el seu genoma és transformat utilitzant com plasmidi que conté el fragment de gens desapareguts, les cèl·lules transformades produiran β-galactosidasa, mentre cèl·lules no transformants, només són capaces de produir la meitat d'omega del [[monòmer]]. En aquest tipus de transformació, la regió ''polilinker'' del plasmidi és en el fragment de gens de lacZ-α, significant que els plasmidis recombinats reeixidament produïts tindran el gen desitjat introduït a algun lloc dins de lacZ-α. Quan aquest fragment de gens interromput és expressat per ''E. coli'', cap proteïna de lacZ-α utilitzable no es produeix, i per això cap β-galactosidasa utilitzable no es forma. Quan creix en medis de cultiu que contenen el sucre de [[galactosa]] modificada incolora (X-gal) les colònies que poden metabolitzar el [[Substrat (biologia cel·lular)|substrat]] (han resultat transformades, però no per plasmidis recombinants) apareixeran tenyides de color blau; les colònies que no poden metabolitzar el substrat (transformades per plasmidis recombinants) seran blanques.
| |||