ADN lligassa: diferència entre les revisions
Contingut suprimit Contingut afegit
m Corregit: IV: complexes amb > IV: complexos amb |
m Corregit: hidrogen. Quant més > hidrogen. Com més |
||
Línia 84:
Les ADN lligases han esdevingut una eina essencial en la recerca moderna de biologia molecular per generar les seqüències d’ADN recombinades. Per exemple, les ADN lligases són utilitzades amb [[enzims de restricció]] per introduir fragments d’ADN, sovint gens, dins els plasmidis.
Un aspecte vital, i a vegades delicat, per aconseguir uns experiments de recombinació satisfactoris que incloguin la lligadura de fragments de terminacions cohesives és controlar la temperatura òptima. En la majoria dels experiments s'utilitza T4 ADN lligasa (aïllada del [[bacteriòfag]] T4), que es presenta més activa a 25°C. Tot i així, per tal d’aconseguir lligadures satisfactòries amb fragments finals cohesius ("terminacions enganxades"), la temperatura òptima de l’enzim necessita ser equilibrada amb la temperatura de fusió T<sub>f</sub> (també amb la temperatura d’anellament) <ref name="Current Protocols">Tabor, Stanley. DNA ligases. Chapter in: Current Protocols in Molecular Biology, Book 1. 2001: Wiley Interscience.</ref> dels fragments d’ADN per tal que pugiun ser lligats. Si la temperatura ambient és massa elevada T<sub>m</sub>, no es produirà un aparellament homogeni de les terminacions amb tendència a enganxar-se a causa de l’elevada temperatura, que afecta els enllaços d’hidrogen.
Com que els fragments d’ADN no tenen terminacions cohesives per anellar, esdevé menys important el fet de controlar la temperatura òptima. Le temperatura més eficient de lligadura serà la temperatura en la qual l’ADN lligasa T4 funcioni de manera òptima (l’ADN lligasa T4 és l’únic ADN lligasa que està disponible comercialment per anellar les terminacions afeblides).<ref name="Current Protocols">Tabor, Stanley. DNA ligases. Chapter in: Current Protocols in Molecular Biology, Book 1. 2001: Wiley Interscience.</ref> Per tant, la majoria d'unions de terminacions afeblides són portades a terme a 20-25°C.
| |||