Transformació bacteriana: diferència entre les revisions

Contingut suprimit Contingut afegit
m Corregit: experiment -> experiment, ja que l'
m Correcció: tipografia graus
Línia 21:
La competència artificial no es codifica als gens de la cèl·lula. En canvi és provocat per procediments de laboratori en els quals les cèl·lules es fan passivament permeables a l'ADN, utilitzant condicions que no ocorren normalment a la natura.<ref>Large-volume transformation with high-throughput efficiency chemically competent cells. Focus 20:2 (1998). {{en}}</ref>
 
Les cèl·lules es refreden en presència de [[catió divalent|cations divalents]] com [[Calci|Ca<sup>2+</sup>]] (en [[clorur de calci|CaCl<sub>2</sub>]]) això prepara les parets cel·lulars i les torna permeables a l'ADN del [[plasmidi]]. Les cèl·lules s'incuben en gel amb l'ADN i llavors es realitza un breu xoc tèrmic (p. ex. 42 &nbsp;°C durant 30-120 segons), la qual cosa fa que l'ADN ingressi a la cèl·lula. Aquest mètode funciona molt bé per als plasmidis circulars d'ADN. Una preparació excel·lent de cèl·lules competents donarà colònies a ~10<sup>8</sup> per micro[[gram]] (μg) de plasmidi. Una preparació pobra estarà sobre 10<sup>4</sup>/g o menys. Les bones preparacions no comercials n'haurien de donar 10<sup>5</sup> a 10<sup>6</sup> transformants per μg de plasmidi.
 
El mètode normalment no funciona bé per a molècules lineals com ara fragments de [[DNA cromosòmic]], probablement perquè els [[enzims]] d'[[exonucleasa]] a la cèl·lula ràpidament degraden el DNA lineal. Tanmateix, les cèl·lules que són naturalment competents es transformen normalment més eficaçment amb DNA lineal que amb plasmidis.