Test d'Ames: diferència entre les revisions
Contingut suprimit Contingut afegit
Línia 4:
== Procediment general ==
Aquesta prova utilitza diverses soques del bacteri Salmonella typhimurium alterades genèticament per presentar mutacions en els gens implicats en la síntesi d'histidina. A causa d'aquestes mutacions, aquests bacteris requereixen d'un subministrament extern d'histidina per al seu creixement. L'assaig posa a prova la capacitat del mutagen per provocar una alteració genètica en els bacteris que permeti el retorn al creixement en un suport lliure d'histidina. Les soques de l'emprovador estan especialment construïdes per tenir una Mutació amb canvi puntual en els gens necessaris per sintetitzar histidina, que permet la detecció de mutàgens que actuen a través de diferents mecanismes. Alguns compostos són molt específics, causant reversions en només una o dues cepas.<ref>{{cita publicación| autor= Bruce N. Ames, E. G. Gurney, James A. Miller, and H. Bartsch | título= Carcinogens as Frameshift Mutagens: Metabolites and Derivatives of 2-acetylaminofluorene and other Aromatic Amine Carcinogens | revista= PNAS | año= 1973 | volumen= 69| páginas= 3128-2132 | url = http://www.pnas.org/cgi/content/full/69/11/3128}}</ref> El provador de ceps també porta mutacions en els gens responsables de la síntesi del lipopolisacàrid, fent que la paret cel·lular dels bacteris sigui més permeable,<ref>{{cita publicación| autor= Bruce N. Ames, Frank D. Lee, and William E. Durston | título= An Improved Bacterial Test System for the Detection and Classification of Mutagens and Carcinogens | revista= PNAS | año= 1973 | volumen= 70 | páginas= 782-6 | url = http://www.pnas.org/cgi/content/full/70/3/782}}</ref> i en la supressió reparen el sistema per fer la prova més sensible.<ref>{{cita publicación| autor= Joyce McCann, Neil E. Spingarn, Joan Kobori, and Bruce N. Ames | título= Detection of Carcinogens as Mutagens: Bacterial Tester Strains with R Factor Plasmids | revista= PNAS | año= 1975 | volumen= 72 | páginas= 979-83 | url = http://www.pnas.org/cgi/content/full/72/3/979}}</ref> En l'assaig també s'afegeixen enzims del fetge<ref name=ame>{{cita web |url= http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/A/AmesTest.html |título=Ames Test |fechaacceso=26 de gener de 2010 |idioma= anglès }}</ref> (provinents d'extracte de fetge de rata) per simular l'efecte del metabolisme, ja que alguns compostos -com el
Els bacteris s'estenen sobre una placa d'agar amb una petita quantitat d'histidina i el compost químic l'efecte mutagènic es vol comprovar. Aquesta petita quantitat d'histidina en el mitjà de cultiu permet als bacteris créixer per un temps inicial i tenir l'oportunitat de mutar. Quan la histidina s'esgota, només els bacteris que hagin mutat per obtenir la capacitat de produir la seva pròpia histidina van a sobreviure i multiplicar-se. En l'experiment la placa s'incuba durant 48 hores, i la mutagenicitat de la substància serà proporcional al nombre de colònies observades a la placa.
| |||