Diferència entre revisions de la pàgina «Cosmidi»

2.314 bytes afegits ,  fa 1 any
cita
(+ == Bibliografia == de https://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%B3smido)
(cita)
Els cosmidis són uns tipus de vectors de clonació.
Un '''cosmidi''' és una mena de [[Vector (biologia molecular)|vectors]] utilitzat per fer [[genoteca|genoteques]] d'[[ADN]] molt grans, ja que permeten inserir-hi molt tros d'ADN, fins a 45 kpbs, el doble que els vectors de substitució de [[fag lambda|λ]]. Són híbrids de plasmidis i fag. Tenen del:
 
*[[plasmidi]]: l'[[ori C]] i el factor de resistència a [[ampicil·lina]].
Realment un cosmidi consisteix en un plasmidi al qual se li han afegit uns segments del genoma d'un bacteriòfag, el fag λ.<ref>{{Ref-publicació|cognom=|nom=|autor=Hohn, Barbara; Murray, Kenneth|article=Packaging recombinant DNA molecules into bacteriophage particles in vitro|publicació=Proc. Natl. Acad. Sci. USA.|llengua=anglès|url=|volum=74|exemplar=8|any=|data=agost 1977|pàgines=3259–3263|doi=10.1073/pnas.74.8.3259|pmc=431522|pmid=}}</ref> Un cosmidi conté:
*[[fag Lambda|fag λ]]: els extrems cos, que com que són complementaris permeten la circularització.
 
'''Per part del l'plasmidi''', l'ori C i un gen de resistència a un antibiòtic, això depèn del tipus de plasmidi del qual derivi i, per tant pot contenir més segments com ara el gen LacZ, que permet la selecció blanc / blau de les colònies.
 
'''Per part del fag λ''', els extrems COS, extrems complementaris del genoma del fag i que s'empren per a la recircularització del mateix.
 
Aquests vectors faciliten la feina perquè permeten l'empaquetament in vitro de les seqüències entre dos extrems COS i usar els fags empaquetats per transfectar soques d'E coli, aconseguint un plasmidi en el bacteri, ja que el cosmidi es recirculariza a l'entrar gràcies als extrems COS. També té gens de resistència a antibiòtics d'origen plasmídic, que ajuden en la identificació de cèl·lules hostes que contenen els cosmidis recombinants. Després d'inserir fragments de DNA, els cosmidis recombinants s'empaqueten en la càpside proteica de λ per formar partícules fàgiques infectives. Una vegada que en la cèl·lula hoste, el cosmidi es replica com plasmidi.
 
'''Procediment de clonació'''
 
a) Segons els llocs de múltiple clonatge (MSC) o els llocs de restricció, es digereix el cosmidi amb l'enzim de restricció corresponent a l'estratègia experimental, tallant el cosmidi pels extrems COS, linealitzant-lo.
 
b) Es tracta amb una fosforilasa, que hidrolitza els grups P dels extrems 5 ', per tal d'evitar que l'insert s'afegeixi a un extrem.
 
c) Es tracta la nostra mostra d'ADN i el cosmidi amb enzims de restricció compatibles.
 
d) Es barreja la mostra amb el cosmidi i s'afegeix ADN lligasa. Si seleccionem aquells csmidis que hagin quedat amb una grandària apropiada, podem encapsidar-los en el fag lambda. Després infectem i seleccionem els bacteris gràcies a que el cosmidi porta un gen de resistència a ampicil·lina.
 
== Usos dels cosmidis ==
Han estat àmpliament usats en l'elaboració de genoteques de DNA genòmics de grans dimensions, ja que permeten la introducció d'inserits de DNA de fins a 45 kb, el doble que els vectors derivats de l'eliminació de part del genoma del fag λ, els fagèmids.
 
Així permeten empaquetar ''[[in vitro]]'' amb una gran eficiència perquè vénen de λ, i recuperació i el treball en [[placa de petri]] és més fàcil gràcies al comportament de plasmidi.
 
== Etimologia ==
El mot tècnic Cosmidi, deriva de la fusió de (llocs COS) i (plasmidi) originant (cos-midi).
 
== Referències ==
 
== Bibliografia ==
9.203

modificacions