Diferència entre revisions de la pàgina «Cosmidi»

31 bytes afegits ,  fa 1 any
→‎Usos dels cosmidis: enllaços i petites correccions
m
(→‎Usos dels cosmidis: enllaços i petites correccions)
Els cosmidis són uns tipus de [[Vector de clonació|vectors de clonació]].
 
Realment un cosmidi consisteix en un [[plasmidi]] al qual se li han afegit uns segments del [[genoma]] d'un [[bacteriòfag]], el [[Fag lambda|fag λ]].<ref>{{Ref-publicació|cognom=|nom=|autor=Hohn, Barbara; Murray, Kenneth|article=Packaging recombinant DNA molecules into bacteriophage particles in vitro|publicació=Proc. Natl. Acad. Sci. USA.|llengua=anglès|url=|volum=74|exemplar=8|any=|data=agost 1977|pàgines=3259–3263|doi=10.1073/pnas.74.8.3259|pmc=431522|pmid=}}</ref>
 
== Constitució del cosmidi ==
'''Per part del fag λ''', els extrems COS, extrems complementaris del genoma del fag i que s'empren per a la recircularització del mateix.
 
Aquests vectors faciliten la feina perquè permeten l'empaquetament in vitro de les seqüències entre dos extrems COS i usar els fags empaquetats per transfectar soques d'''E coli'', aconseguint un plasmidi en el bacteri, ja que el cosmidi es recircularizarecircularitza a l'entrar gràcies als extrems COS. També té gens de resistència a antibiòtics d'origen plasmídic, que ajuden en la identificació de cèl·lules hostes que contenen els cosmidis recombinants. Després d'inserir fragments de DNA, els cosmidis recombinants s'empaqueten en la càpside[[càpsida]] proteica de λ per formar partícules fàgiques infectives. Una vegada que en la cèl·lula hoste, el cosmidi es replica com plasmidi.
 
'''Procediment de clonació'''
 
'''== Procediment de clonació''' ==
a) Segons els llocs de múltiple clonatge (MSC) o els llocs de restricció, es digereix el cosmidi amb l'enzim de restricció corresponent a l'estratègia experimental, tallant el cosmidi pels extrems COS, linealitzant-lo.
 
c) Es tracta la nostra mostra d'ADN i el cosmidi amb enzims de restricció compatibles.
 
d) Es barreja la mostra amb el cosmidi i s'afegeix [[ADN lligassa]]. Si seleccionem aquells cosmidis que hagin quedat amb una grandària apropiada, podem encapsidar-los en el [[fag lambda]]. Després infectem i seleccionem els bacteris gràcies a que el cosmidi porta un gen de resistència a [[ampicil·lina]].
 
== Usos dels cosmidis ==
9.203

modificacions