Vector de clonació: diferència entre les revisions

Contingut suprimit Contingut afegit
m neteja i estandardització de codi
m Bot elimina espais sobrants
Línia 1:
[[Fitxer:pBR322.svg|miniatura|El plasmidi [[pBR322]] és un dels primers plàsmids utilitzats com vector de clonació.]]
Els '''vectors de clonació''', en [[anglès]]: ''cloning vector'', són un petit tros d'[[ADN]] agafat d'un [[virus]] o un [[plasmidi]] d'una cèl·lula o d'un organisme superior, que es poden mantenir de manera estable en un organisme, i dins del qual es pot inserir un fragment d'ADN forà amb intencions d'aconseguir [[clonació molecular]].<ref>{{ref-web|url=http://www.theodora.com/genetics/#cloningvector |títol=Definition of cloning vector |obra=Genome Dictionary |consulta=2012-10-18}}</ref> El vector per tant, conté característiques que permeten, per exemple, si es tracta el vector i l'ADN forà amb un [[enzim de restricció]], enllaçar els fragments junts. Després que un fragment d'ADN hagi estat clonat dins un vector de clonació, pot ser posteriorment [[subclonació|subclonat]] dins un altre vector dissenyat per a un ús més específic.
 
== Constitució ==
Línia 32:
- S'ha modificat perquè presenti moltes seqüències de reconeixement per enzims de restricció que s'han agrupat en una regió anomenada ''polylinker'' o ''multiple cloning site''.
 
- Permet la identificació senzilla dels plasmidis recombinants, car conté un fragment de gen bacterià lacZ que produeix colònies de color blau, en desdoblar i precipitar el reactiu X-Gal, per mitjà de l'enzim Beta-galactosidasa codificada per ''lacZ''. Si hom insereix un fragment d'ADN en el ''polylinker'', s'inactiva aquest gen; l'enzim Beta galactosidasa no se sintetitza i per tant l'X-gal no precipita i això dóna lloc a colònies de color blanc.
 
=== Bacteriòfag lambda ===
Article principal: ''[[Fag lambda|Fag λ]]''
 
El genoma del fag lambda s'ha cartografiat i seqüenciat completament. Per ser utilitzat de vector, el terç central de la seva cromosoma pot ser reemplaçat per ADN exogen, sense que això afecti a la capacitat del fag d'infectar cèl·lules i formar [[Càpsida|càpsides]].Per clonar ADN utilitzant aquest vector, es purifica l'ADN del fag i es talla amb un enzim de restricció, amb el mateix enzim de restricció tallem el fragment d'ADN d'interès i els unim amb una [[ADN lligassa]]. Els vectors lambda recombinants s'empaqueten in vitro en les càpsides proteiques del fag, i s'introdueixen en cèl·lules hoste bacterianes. Dins dels bacteris, els vectors es repliquen i formen moltes còpies del [[Bacteriòfag|fag]] infectiu, portant totes elles el fragment d'ADN d'interès en la clonació. Els vectors fàgics poden transportar fragments de fins a 20 kb (quilobases).
 
=== Cosmidis ===
Article principal: ''[[Cosmidi]]''
 
Els cosmidis són vectors híbrids utilitzant parts del cromosoma de lambda i de plasmidis. Tenen la seqüència cos del fag lambda, necessària per a l'empaquetament de l'ADN del fag dins de la seva coberta proteica; a més contenen seqüències plasmídiques necessàries per a la replicació i gens de resistència a antibiòtics. Els cosmidis poden transportar gairebé 50 kb d'ADN inserit.
 
=== YAC ===
Article principal: ''[[Cromosoma artificial del llevat]]''
 
Els YAC són cromosomes artificials de llevat. Un YAC té telòmers en els seus extrems, un origen de replicació i un centròmer. Aquests components estan units a gens marcadors de selecció i a un grup d'enzims de restricció per inserir ADN exogen.