Hibridació in situ per fluorescència: diferència entre les revisions
Contingut suprimit Contingut afegit
Robot estandarditza i catalanitza referències, catalanitza dates i fa altres canvis menors |
m neteja i estandardització de codi |
||
Línia 9:
== Protocol ==
El primer pas a realitzar és fer un '''shock hipotònic''' a les cèl·lules amb [[clorur de potassi]] (KCl) per tal d'inflar les cèl·lules d'aigua per fer-les més grans i que es puguin apreciar millor les senyals de les sondes.
Seguidament s'han de '''fixar''' les cèl·lules, normalment es fa amb una [[solució carnoy]], composada per [[àcid acètic]] i [[metanol]] en proporció 1:3. Aquest procés serveix per a preservar el DNA i la morfologia dels nuclis de les cèl·lules i es sol repetir de 3 a 4 vegades.
Una vegada les cèl·lules estan fixades, es fan [[Extensió sanguínia|'''extensions''']] fines en [[portaobjectes]]. com que les cèl·lules encara no estan tenyides, per a marcar la zona en la que s'ha fet l'extensió s'utilitza un llapis amb punta de diamant. Les extensions es deixen assecar.
la '''hibridació''' es realitza seguint el procés d'instruccions que dona la casa comercial de cada casa. hi ha algunes sondes que venen directament preparades, mentre que altres s'ha de preparar amb una mescla d'altres elements. per tal d'hibridisar bé, els portaobjectes es posen a l'hibridador durant tota la nit.
El següent dia es fan '''rentats post-hibridació''' per a eliminar l'excedent de sondes i per tal que només es vegin els nuclis. també es tenyeixen amb [[4 ',6-diamidino-2-fenilindol|DAPI]] per a veure bé el nucli de color blau.
== Tipus de sondes de FISH ==
=== Sondes centromèriques ===
Consisteixen en seqüències d'[[Àcid desoxiribonucleic|ADN]] repetitives o satèl·lit que es troben al [[centròmer]] o a la zona pericentromèrica d'un [[cromosoma]] específic, formats per [[heterocromatina]].<ref name=":0">Espinet B, Vallcorba I, Buño I. Capítulo 4: Hibridación “in situ” fluorescente (Fluorescence “in situ” hybridization, FISH). En: Manual Práctico de Genética Hematológica. 2016 ISBN: 978-84-608-1494-8 (Format ebook "App" per Android); 978-84-608-5757-0 (Format ebook "App" iOS)</ref>
Linha 27 ⟶ 26:
=== Sondes de locus específic o de seqüència única ===
Les sondes de locus específic hibriden en una regió específica del genoma que correpon a un gen o a una banda cromosòmica d'interès <ref name=":0" />.
Permeten la detecciö de alteracions numèriques i estructurals tant en nuclis en metafase com en interfase. Normalment s'utilitzen 3 tipus diferents de sondes de locus específic: <ref name=":0" />
Linha 35 ⟶ 34:
==== Doble fusió (dual fusion) ====
En aquest cas s'utilitzen dues sondes de diferents colors que senyalen regions separades en el genoma. en el cas que es produeixi una reorganització dels cromosomes o una [[Translocació cromosòmica|translocació]] de gens les dues sondes es veuran juntes i es crearà un patró d'un tercer color.<ref name=":0" />
Normalment es fan servir sondes vermelles i verdes que al ajuntar-se produeixen una senyal groga.<ref name=":0" />
==== Break apart ====
| |||