Transformació bacteriana: diferència entre les revisions
Contingut suprimit Contingut afegit
m Robot: Reemplaçament automàtic de text (-Veure també +Vegeu també, -= Veure també +=Vegeu també, - Es s + Se s, - es s + se s, - exitós + reeixit , - exitosa + reeixida , -ïnt +int, -ïsme +isme, -ïsta +ista, - derrotar als + derrotar els |
|||
Línia 25:
Les cèl·lules es refreden en presència de [[catió divalent|cations divalents]] com [[Calci|Ca<sup>2+</sup>]] (en [[clorur de calci|CaCl<sub>2</sub>]]) això prepara les parets cel·lulars i les torna permeables a l'ADN del [[plasmidi]]. Les cèl·lules s'incuben en gel amb l'ADN i llavors es realitza un breu xoc tèrmic (p. ex. 42 °C durant 30-120 segons), la qual cosa fa que l'ADN ingressi a la cèl·lula. Aquest mètode funciona molt bé per als plasmidis circulars d'ADN. Una preparació excel·lent de cèl·lules competents donarà colònies a ~10<sup>8</sup> per micro[[gram]] (μg) de plasmidi. Una preparació pobra estarà sobre 10<sup>4</sup>/g o menys. Les bones preparacions no comercials n'haurien de donar 10<sup>5</sup> a 10<sup>6</sup> transformants per μg de plasmidi.
El mètode normalment no funciona bé per a molècules lineals com ara fragments de [[DNA cromosòmic]], probablement perquè els [[
L'[[electroporació]] és una altra manera de fer forats breument en cèl·lules (bacterianes i algunes [[eucariota|eucariotes]]) impressionant-los amb un [[camp elèctric]] de 10-20 k[[volt|V]]/cm. Els plasmidis poden introduir-se a la cèl·lula a través d'aquests forats. Aquest mètode és flexible per utilitzar amb DNA de plasmidis relativament grans. <ref>Transformation efficiency of E. coli electroporated with large plasmid DNA. Focus 20:3 (1998). {{en}}</ref>els mecanismes de reparació naturals de la membrana tancaran ràpidament aquests forats després de la ruptura.
| |||